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痰檢實驗室操作規程
一、檢查程序
(一)痰標本收集:在三個痰標本盒上注明病人的姓名、編號、檢查日期和容器序號。病人shou次留痰前應指導病人,留取“即時痰”、“夜間痰”、“晨痰”合格的痰標本,對所送不合格痰標本除常規檢查外,應要求患者重新送檢,合格的痰標本包括干酪痰、血痰、粘液痰。唾液或口水用于病人確診時為不合格痰標本,標本量一般在3~5 ml。
(二)痰涂片制作:
1、檢查前對新的玻片用95%的乙醇擦拭脫脂,經干燥、清潔、檢查無油污、無劃痕后作為合格的玻片備用。在已經準備的痰玻片背面左端的1/3處注明編號,挑取痰標本中可疑部分約0.05~0.1 ml,于玻片正面右側2/3處,均勻涂抹成10×20 mm的卵圓形痰膜。
2、痰膜朝上靜置自然干燥后(一般約需要30分鐘)進行染色鏡檢。當氣溫低,痰膜不易干燥時,嚴禁將玻片直接在火焰上烘拷,以防產生氣溶膠或痰膜脫落。一張載玻片上只能涂抹一份痰標本,一張載玻片只能使用一次,不得清洗后再次用于痰涂片染色檢查。
3、涂抹完畢后的痰標本,在檢查結果報告前,應暫時保留。以備涂片、染色不合格影響鏡檢結果時,重新涂片和染色之用。
4、萋-尼氏染色油鏡檢查.
(三)實驗室登記:按照年度病人序號和痰標本序號在實驗室登記本上進行登記,并以同樣的號碼在痰涂片檢查單上進行標記。檢驗單的病人姓名應與實驗室登記本一致。
(四)痰涂片檢查結果登記與報告:及時在登記本上登記痰涂片檢查結果。當病人的三次痰涂片檢查完成后,發現有陽性痰涂片,應在規定時間內報醫院防???,縣級結核病防治機構再對痰涂片進行確認。
(六)痰涂片的保存:每個查痰點鏡檢后的全部痰涂片應按實驗室登記本序號連續排列,分別存放在各點固定的玻片盒中,供上級實驗室復核確認。
(七)痰檢質量控制:每個痰涂片檢查點均按照中國結核病防治規劃《痰涂片鏡檢質量保證手冊》的要求,作為一個獨立的被質控單位接受室間質量評估和檢查工作。
二、萋-尼氏染色
1、涂片自然干燥后,放置在染色架上,玻片間距保持在10 mm以上的距離;火焰固定(在5秒鐘內將玻片置于火焰上來回烘烤4次)。
2、滴加石碳酸復紅染液,蓋滿痰膜,火焰加熱至出現蒸汽后,脫離火焰,保持染色5分鐘。染色期間應始終保持痰膜被染色液覆蓋,必要時可續加染色液。加溫時勿使染色液沸騰。
3、流水自玻片一端輕緩沖洗,沖去染色液,瀝去標本上剩余的水。
4、自痰膜上端外緣滴加脫色劑布滿痰膜,脫色1分鐘;如有必要,需流水洗去脫色液后,再次脫色至痰膜無可視紅色為止。
5、流水自玻片一端輕緩沖洗,沖去脫色液,瀝去玻片上剩余的水。
6、滴加亞甲藍復染液,染色30秒鐘。
7、流水自玻片一端輕緩沖洗,沖去復染液,瀝去標本上剩余的水。待玻片干燥后鏡檢。
一張染色合格的痰玻片,由于被亞甲藍染色而呈亮藍色。將染色后的玻片放置在報紙上,如果報紙上的文字透過痰膜不能被看清,表明該玻片涂抹過厚。